| 中文名称Chinese name
|
肠道病毒71人清道夫受体B2（hSCARB2）转基因动物模型 |
| 编号Model number |
|
| 英文名称English name |
Enterovirus 71 human scavenger receptor B2 (hSCARB2) transgenic animal model |
| 物种Species name |
|
| 品系Strain name |
|
| 人类疾病Human diseases |
|
| 传染性Infectivity |
是 |
| 微生物Microorganism |
|
| 类别Category |
转基因动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
SCARB2转基因 |
| 制作方法Making method |
pCMV6-XL5-h-SCARB2质粒购自美国Origene公司（Clone ID NM_002257）。EcoR I和Xho I酶切回收h-SCARB2片段，并克隆入pCDNA3.1(+)质粒中巨细胞瘤病毒（CMV）启动子下游，构建全身表达人SCARB2的载体。转基因载体经测序验证后，用Pvu I将载体线性化，Sephedex G50柱纯化。将DNA浓度调整至5 ng/uL，用显微注射法将DNA注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。经鼠尾DNA PCR对首建鼠的基因型进行鉴定，得到阳性首建鼠3只（图1A）。随后，用逆转录PCR分析了首建鼠F1代组织中目的基因的表达情况，发现人SCARB2主要在转基因小鼠的骨骼肌和脑组织中表达（图1B）。随后，分别用Western Blot和免疫组化分析了人SCARB2蛋白在脑和骨骼肌组织中的表达情况。由于人SCARB2与小鼠SCARB2同源性较高，存在抗体交叉结合现象。Western Blot发现转基因小鼠脑和骨骼肌组织中SCARB2蛋白表达量高于同窝阴性（图1C-1D）。免疫组化发现SCARB2蛋白主要分布于转基因小鼠的骨骼肌和脑组织中（图2A-2B），该结果表明成功建立了脑和肌肉组织表达人SCARB2蛋白的转基因小鼠。
注：M：DNA分子质量标准；1-15：首建鼠；NTG：同窝阴性小鼠；TG：转基因小鼠；A：PCR鉴定阳性首建鼠；B：逆转录PCR分析转基因小鼠组织内人SCARB2基因表达；C： Western Blot分析人SCARB2蛋白在转基因小鼠脑组织中的表达，GAPDH为内参；D： Western Blot分析人SCARB2蛋白在转基因小鼠骨骼肌组织中的表达，GAPDH为内参。
图1 人SCARB2转基因小鼠的构建及鉴定
Note: M: DNA molecular weight standard; Lane1-15:Transgenic mouse line; NTG: Negative littermates; TG: Transgenic mice; A:Transgenic mice lines identification by PCR using the tail genomic DNA as template; B: Reverse-transcriptase PCR analysis the human SCARB2 gene expression in tissues of Tg mice; C: Western blot detected the expression of human SCARB2 protein synthesis in brain of Tg mice; D: Western blot detected the expression of human SCARB2 protein synthesis in muscle of Tg mice. The data were normalized to GAPDH expression
Fig.1 Establishment and identification of the transgenic mice expressing human SCARB2.
注： NTG：同窝阴性小鼠；TG：转基因小鼠； A-B：21日龄小鼠脑和肌肉的免疫组；SCARB2蛋白如黑色箭头所示。放大倍数为：100×。
图2 SCARB2转基因小鼠的免疫组化鉴定
Note: NTG: Negative littermates; TG: transgenic mice; A-B: immunohistochemical analysis of brain and muscle of 21-day TG mice and the positions of SCARB2 protein are denoted with black arrows, respectively. Magnification: 100×.
Fig.2 Immunohistochemical identification of the SCARB2 transgenic mice |
| 生物学特征Biological characteristics |
SCARB2基因表达。 |
| 医学用途Medical use |
通过建立表达PSGl-1的转基因小鼠，我们证实人PSGL-1有一定的促进EV71感染转基因小鼠的功能。为进一步在体内证实人SCARB2的受体功能，以期改良现有的EV71感染小鼠模型，我们通过建立表达人SCARB2基因的转基因小鼠，在体内验证了该蛋白的受体功能。 |
| 临床表现Clinical manifestation |
无 |
| 病理表现Pathology |
|
| 发病天数Days of onset |
|
| 发病过程Pathogenesis process |
|
| 临床诊断Clinical diagnosis |
|
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
|
| 保藏单位Preservation unit |
|
| 参考文献Reference |
|
| 录入/更新时间Date |
12-03-20 |
| 备注Remarks |
|
当前位置：
