| 中文名称Chinese name
|
手足口病柯萨奇病毒A16型灌胃感染小鼠模型 |
| 编号Model number |
|
| 英文名称English name |
Coxsackievirus A16 intragastrically infected mice model |
| 物种Species name |
小鼠
|
| 品系Strain name |
ICR
|
| 人类疾病Human diseases |
手足口病 |
| 传染性Infectivity |
CA16病毒对人类具有传染性，属于三类病原体，主要通过粪-口途径传播 |
| 微生物Microorganism |
柯萨奇病毒A16型
|
| 类别Category |
传染性疾病动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
CA16病毒灌胃感染7日龄ICR小鼠 |
| 制作方法Making method |
1. 病毒准备：CA16病毒(shzh05-1，GenBank: EU262658)，2008年分离自深圳市，在人横纹肌瘤细胞（RD）中培养、扩增，并采用反复冻融法释放病毒，离心富集病毒。（1）细胞病毒培养操作：RD细胞经常规传代培养接种到T75细胞培养瓶，培养至融合度约80%；感染前弃去原培养基，细胞用含2%双抗的PBS 洗2遍，吸出PBS后加入无血清DMEM培养基。接种适量的CA16病毒后，置于37℃ 5% CO2培养箱孵育1~2h；之后弃去无血清培养基，加入完全培养基继续培养。接种病毒后2~3d细胞病变CPE达到+++～++++，将T75细胞瓶置封口袋中，-80℃超低温冰箱冻化3次。然后将培养液转移至50mL离心管中，4℃ 2000rpm离心20min，沉淀细胞碎片。吸取病毒上清，分装后冻存，并测定病毒滴度TCID50。（2）组织病毒培养操作：将CA16病毒以肌肉点注方式感染10日龄ICR乳鼠，三天后取肌肉组织置于适量PBS中研磨均匀，3000rpm离心30min，上清即为病毒液，分装后置于-80℃冰箱保存。2. 实验动物：采用SPF级7日龄ICR小鼠乳鼠，母鼠自然哺乳，在ABSL-2实验室独立饲养。CA16动物模型建立实验通过IACUC审核，符合动物实验要求。3. 病毒感染：根据预实验确定的感染剂量，即病毒滴度为1. 0×108 TCID50/mL的CA16毒株，将病毒经灌胃途径感染小鼠，感染剂量为100μl。对照组灌胃同等量的PBS。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
ICR小鼠毛色白化，是国际通用的封闭群小鼠。7日龄ICR乳鼠对手足口病原较为敏感，由于CA16病毒具有嗜肌性，乳鼠感染后常表现出竖毛、单肢瘫痪、双肢瘫痪、甚至死亡的临床表现，属于手足口病部分疾病模型动物。 |
| 医学用途Medical use |
用于CA16病毒自然感染、发病机制研究，以及病毒疫苗研制和抗病毒药物的药效学研究 |
| 临床表现Clinical manifestation |
7日龄ICR小鼠灌胃感染CA16病毒5天后，开始出现不同程度的临床症状，症状由轻到重包括：驼背或炸毛，后肢无力，单后肢瘫痪，双后肢瘫痪，严重的直至死亡。临床症状评分持续升高，第8天感染小鼠出现死亡。到观察期结束（感染后12天）时平均临床评分为3分，存活率为60%。监测体重情况，发现感染小鼠体重增加未出现显著减缓，与未感染的对照小鼠不存在显著性差异。分析灌胃途径感染CA16的小鼠血液与组织中病毒载量发现，5 d.p.i血液中病毒载量病毒载量高于3 d.p.i，约为105 Copies/mg。小鼠中肌肉病毒载量变化与腹腔注射途径感染小鼠趋势相同，病毒载量在感染后第5天均有提升：由106 Copies/mg提升至107 Copies/mg。在其它组织中，CA16病毒载量明显偏低，未有组织病毒载量超过104 Copies/mg。 |
| 病理表现Pathology |
CA16病毒具有明显的嗜肌性，感染小鼠后肢肌肉中的病毒载量最高，且感染后的临床症状也表现为后肢的瘫痪症状，病理结果分析发现：骨骼肌病理损伤严重，具体表现为骨骼肌细胞变性坏死、炎细胞浸润。除后肢肌肉外，脑组织局部神经元周五和网状神经毡可见空泡，少数神经元发生固缩现象。其他组织，包括脾、胸腺、心脏、肝脏、肺、肾、小肠组织均未见明显病理损伤。 |
| 发病天数Days of onset |
ICR 7日龄小鼠感染CA16病毒后第5天出现不同程度的临床症状，此后病症持续加重、临床评分持续升高，到感染后第8天出现实验小鼠死亡，到观察期结束（感染后12天）时平均临床评分为3分，存活率为60%。 |
| 发病过程Pathogenesis process |
动物经灌胃感染CA16病毒后，经胃肠道进入机体内。病毒在入侵的局部上皮细胞中完成增殖，然后病毒侵入局部淋巴组织中继续增殖并释放入血导致第一次病毒血症。病毒随血液传播接触到正常靶细胞。病毒表面的VP1蛋白与靶细胞表面特异性受体结合，完成吸附过程，其基因组RNA进入胞质。之后，病毒以其正链RNA作为模板，合成互补的负链RNA，又以负链RNA为模板合成病毒正链RNA，从而得到大量病毒RNA，进入子代病毒颗粒组装阶段。通过转录、翻译，复制出二代病毒，再次释放入血形成第二次病毒血症并引起临床症状。 |
| 临床诊断Clinical diagnosis |
根据感染后动物血液和组织中病原学CA16核酸检测阳性结果，以及表现出的瘫痪、死亡等手足口病原动物感染临床症状，结合后肢肌肉组织病理学改变情况，确定7日龄ICR乳鼠灌胃CA16病毒后得到了手足口病CA16感染模型，属于手足口病的部分疾病模型。 |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
小鼠灌胃感染CA16病毒后表现出典型的症状，即出现后肢单肢或双肢瘫痪，直至死亡；在感染动物血液和肌肉组织中可检测到高病毒载量的CA16病毒，表明病毒在血液和组织中大量扩增。病理检测可见后肢肌肉组织明显病变，说明病毒对肌肉组织产生损伤，与临床症状相一致。 |
| 保藏单位Preservation unit |
中国医学科学院医学实验动物研究所 |
| 参考文献Reference |
|
| 录入/更新时间Date |
|
| 备注Remarks |
|
当前位置：
