| 中文摘要Abstract in Chinese |
目的 原核表达猪圆环病毒2b亚型(porcine circovirus subtype 2b,PCV2b)Cap融合蛋白,并分析其免疫原性.方法 以PCV2 毒株(CAU0673)基因组为参考序列,His-Sumo-PCV2b-Cap-pUC57 重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR 扩增目的片段;将其产物克隆至pMAL-C4x 载体中,构建pC4x-PCV2b-Cap 重组质粒,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行直链淀粉树脂纯化.SDS-PAGE 分析目的蛋白的可溶性,Western blot检测其反应原性;以纯化的融合蛋白免疫BALB/c 小鼠,Western blot 检测小鼠血清抗体特异性.结果 经双酶切及测序鉴定,重组质粒pC4x-PCV2b-Cap 构建正确;融合蛋白MBP-Cap(matlose binding protein Cap)最适诱导条件为1 mmol/L IPTG37℃诱导6 h,其以可溶性形式存在,相对分子质量约为81 000,与PCV2b阳性猪血清、兔抗MBP-tag 多克隆抗体及免疫小鼠抗血清均可发生特异性反应.结论 成功构建了 pC4x-PCV2b-Cap 重组表达载体,获得了可溶性的MBP-Cap蛋白,其纯化蛋白具有较好的免疫原性.本文为PCV2b诊断试剂盒的研发奠定了理论基础. |
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