| 中文摘要Abstract in Chinese |
目的 探讨一种可溶性的外分泌因子midkine-a在斑马鱼胚胎心脏发育过程中的功能. 方法 在整体胚胎上做midkine-a RNA的原位杂交实验;利用原有的转基因斑马鱼系Tg ( pmidkine-a:EGFP) ,动态观察胚胎从出生到心脏发育成形这一段时间心脏荧光表达情况;将原有的转基因斑马鱼体系Tg ( phsp:midkine-a:EGFP) 胚胎进行热休克而过表达midkine-a,观察胚胎心脏表型;利用Tg ( pcmlc2:dsRed)鱼系胚胎的心肌细胞核带有红色荧光,能进行单个心脏心肌细胞计数这一特点,将杂合的Tg ( phsp:midkine-a:EGFP )鱼系与纯合的Tg ( pcmlc2:dsRed)鱼系交配,以得到Tg ( phsp:midkine-a:EGFP/pcmlc2:dsRed)的杂合胚胎,对其进行热休克而过表达midkine-a,计算每个胚胎心脏内心肌细胞的总数;用吗啉寡聚核苷酸( morphonino ,MO)阻碍新生胚胎内的midkine-a mRNA表达,观察胚胎心脏表型. 结果 原位杂交试验证实midkine-a在胚胎48 hpf ( hour post fertilization , 受精后, 用来标记斑马鱼胚胎年龄)大时表达于心脏;转基因Tg ( pmidkine-a:EGFP)胚胎在72 hpf时其EGFP表达于心脏;Tg ( phsp:midkine-a:EGFP) 胚胎在过表达midkine-a后心脏变小;吗啉寡聚核苷酸敲除midkine-a对胚胎心脏发育无影响;最后在Tg ( phsp:midkine-a:EGFP/pcmlc2:dsRed )鱼系胚胎内过表达midkine-a导致其单个心脏内心肌细胞数目变少,与其小心脏外形吻合. 结论 midkine-a在斑马鱼胚胎发育过程中表达于胚胎心脏;过表达midkine-a导致胚胎心脏内心肌细胞总数减少及心脏变小;敲除midkine-a则对胚胎心脏发育无影响. |
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