| 中文摘要Abstract in Chinese |
目的 建立心脏特异表达(p)RR的转基因小鼠,研究(p)RR在心肌病发病过程中的调节作用.方法 将(p) RR基因插入到心脏特异表达启动子α-MHC下游,构建转基因表达载体,通过显微注射的方法建立(p)RR转基因小鼠,PCR法鉴定转基因小鼠的基因型:Western blot和免疫组化的方法检测(p)RR在心脏组织中的表达；利用小动物超声仪检测转基因小鼠的心脏结构和功能；双色免疫荧光共聚焦进行(p)RR蛋白在转基因小鼠中的亚细胞定位,Western blot方法检测了钙泵(ATP2A2)、钠-钙交换体1(NCX 1)以及肌钙蛋白T(cTnT)在转基因小鼠心脏组织中表达量的变化情况.结果 建立了心脏高表达(p)RR的转基因小鼠品系；内源性和转基因高表达的(p)RR蛋白均定位在细胞内高尔基体和内质网上；心脏特异高表达(p)RR蛋白使小鼠心脏收缩功能增强,主要表现在与同窝阴性对照小鼠相比,转基因小鼠收缩期左室内径( LVID,systolic)降低9％ (P＜0.05,n=18),收缩期容积( LVESV,systolic)减少了23％ (P ＜0.05,n=18),射血分数EF( ejection fraction)升高14％ (P＜0.01,n=18),短轴缩短率FS( fraction shortening)升高20％ (P ＜0.01,n=18)；和心脏收缩功能和钙离子相关的ATP2A2和NCX 1表达均下调,而cTnT表达量上调.结论 在心脏中过表达(p)RR能够引起心脏收缩功能明显增强,同时直接或间接调节ATP2A2、NCX 1和cTnT表达.提示(p)RR可能是调节心脏中的钙离子而参与影响心肌功能. |
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