斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系的构建

文献名称Document name	斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系的构建
编号Document number
PMIDPMID number
作者Author	曾婷,付贵芳,谢缤灵,等.
中文摘要Abstract in Chinese	microRNA (miRNA)是一类内生的、长度约为19 ～ 23个核苷酸的非编码RNA,通过影响mRNA的稳定性和翻译,来参与基因表达的转录后调控.生物信息学分析表明该基因在各个物种中高度保守.为了阐明该基因在肠道发育中的作用,本文利用Cloning free CRISPR/Cas9基因编辑技术构建miR-196a-1基因敲除的斑马鱼品系.首先通过分析软件筛选出斑马鱼miR-196a-1基因的两个敲除位点,两个敲除位点相隔132 bp,利用PCR技术扩增miR-196a-1的向导DNA,再以向导DNA为模板转录得到miR-196a-1的sgRNA,将miR-196a-1基因的sgRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎1细胞期胚胎中.斑马鱼胚胎发育到36 hpf后进行基因编辑的有效性检测,研究结果显示,miR-196a-1基因出现102 bp碱基的缺失,表明CRISPR/Cas9系统对miR-196a-1基因的敲除有效.对其F0代、F1代、F2代进行筛选,成功获得斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系,为研究miR-196a-1在肠道发育中的作用奠定了基础.
英文摘要Abstract in English
关键词Key word	斑马鱼, microRNA, CRISPR/Cas9, miR-196a-1基因
发表杂志Journal	激光生物学报,Acta Laser Biology Sinica,2020,29(2)
发表年份Year	2020
录入/更新时间Date	2021/07/20