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目的 探讨低蛋白饮食喂养、尼古丁皮下注射及自然选择3种方法形成的胎儿生长受限(FGR)大鼠模型胎盘细胞凋亡情况及所致大鼠FGR可能的致病机制.方法 2018年6月至2019年1月于南方医科大学南方医院动物实验中心将26只Wistar雌鼠随机分为非干预组(n=14)、低蛋白饮食组(n=6)和尼古丁注射组(n=6).非干预组大鼠正常饲养,低蛋白饮食组及尼古丁注射组分别采用相应干预手段建立FGR模型.非干预组共获子鼠132只,有12只出生体重低于同组平均体重2个标准差的FGR弱仔,收集弱仔胎盘作为研究组1(自然选择组);低蛋白饮食组共获子鼠67只,其中FGR弱仔20只,随机选择18只弱仔胎盘作为研究组2(低蛋白饮食组).尼古丁注射组共获子鼠60只,其中FGR弱仔21只,随机选择18只弱仔胎盘作为研究组3(尼古丁注射组).在非干预组随机选择42只适龄幼仔胎盘作为正常对照组.采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测各组胎盘细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测细胞凋亡因子(Bax、Bcl-2、p53、Fas和Fas-L) mRNA表达水平,免疫组织化学染色检测蛋白表达水平.结果 低蛋白饮食和尼古丁皮下注射均成功建立FGR大鼠模型,其FGR发生率明显高于非干预组(正常对照组)(29.89％,35％ vs.9.09％,P＜0.05).自然选择组和尼古丁注射组胎盘细胞凋亡率均显著高于正常对照组[(66.120±14.611)％,(73.046± 13.666)％vs.(28.740±27.184)％,P＜0.01];低蛋白饮食组胎盘细胞凋亡率稍高于正常对照组,差异无统计学意义.与正常对照组相比,研究组1中Bcl-2、Fas-L表达水平显著降低[mRNA表达水平:Bcl-2 (0.257±0.043) vs.(1.000±0.260),P＜0.01;Fas-L (0.285 ±0.065) vs.(1.000±0.196),P＜0.01;蛋白表达水平:Bcl-2 34.60 vs.54.63,P＜0.01;Fas-L 31.93 vs.64.65,P＜0.01];研究组2中Bcl-2、Fas-L表达水平显著降低[mRNA表达水平:Bcl-2 (0.261±0.029) vs.(1.000±0.260),P＜0.01;Fas-L(0.423± 0.032) vs.(1.000±0.196),P＜0.01;蛋白表达水平:Bcl-2 40.05 vs.54.63,P＜0.01;Fas-L 32.45 vs.64.65,P＜ 0.01];p53表达水平显著升高[mRNA表达水平:(1.433±0.151)vs.(1.000±0.242),P＜0.01;蛋白表达水平:48.00 vs.29.10,P＜0.01];研究组3中Bax、p53、Fas表达水平显著升高[mRNA水平:Bax(1.438±0.177) vs.(1.000±0.113), P＜ 0.01;p53 (2.176±0.356) vs.(1.000±0.0.242), P＜ 0.01;Fas(1.335±0.076) vs.(1.000±0.090),P＜0.01;蛋白表达水平:Bax 52.10 vs.36.45,P＜0.05;p53 52.90 vs.29.10,P＜0.01;Fas 49.03 vs.30.35,P＜ 0.05];Bcl-2、Fas-L表达水平显著降低[mRNA水平:Bcl-2 (0.213±0.024) vs.(1.000±0.0.260,P＜0.01);Fas-L (0.503±0.100) vs.(1.000±0.0.196),P＜ 0.01;蛋白表达水平:Bcl-2 32.73 vs.54.63,P＜ 0.01;Fas-L 32.98 vs.64.65,P＜0.01].结论 3种因素所致大鼠FGR胎盘细胞凋亡率均显著升高,说明胎盘细胞凋亡与FGR形成存在关系.低蛋白饮食、尼古丁及自然因素所致FGR大鼠胎盘细胞凋亡途径、凋亡相关因子各不相同,说明不同因素诱发FGR的机制也不完全一致. |
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