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目的 研究豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(Cpserpin)的组织分布及其对丝氨酸蛋白酶的抑制效果. 方法 利用原核表达的重组Cpserpin(rCpserpin)免疫家兔,采用间接ELISA检测免疫后血清的效价,取免疫兔血清,制备抗体并纯化后,采用Western blotting对多克隆抗体进行特异性分析,通过免疫组化试验分别观察rCpserpin在豆状带绦虫成虫和幼虫中的组织分布.构建重组质粒pPIC9K-Cpserpin,线性化后转化至毕赤酵母KM71感受态细胞,用G418筛选的高拷贝菌株进行诱导表达并纯化rCpserpin,采用发色底物法检测不同浓度(6、9、18、21 μg/ml)rCpserpin对0.5 μg/ml α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶等3种丝氨酸蛋白酶活性的抑制效果. 结果 间接ELISA检测结果显示,免疫血清多抗IgG抗体的效价达1∶51 200.Western blotting分析结果显示,纯化后的多克隆抗体可与rCpserpin和兔豆状囊尾蚴虫体可溶性抗原产生特异性反应.免疫组化试验结果显不,Cpserpin在囊尾蚴阶段表达量很低,但在成节和孕节中高度表达,广泛分布于虫体体壁和虫卵中.酵母表达的rCpserpin随浓度增加对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶的抑制效果分别增强,在21 μg/ml浓度时,对3种丝氨酸蛋白酶的抑制率最高,分别为(50.5±2.5)％、 (71.5±1.5)％和(77.4±1.5)％(均P＜0.05).结论 rCpserpin多克隆抗体具有特异性,在豆状囊尾蚴成节和孕节中高表达,且其对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶有较强的抑制作用. |
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